Toplanan kanıtlar, giysiler (kurban, ceset, saldırgan ve olay yerinden) kan, meni, saç, tükürük, ter, doku, lif ve diğer elementleri araştırmak için laboratuvarda incelenir. İlk müdahalelerden biri, kanıtı titiz ve ardışık gözlem yoluyla değerlendirmek, biyolojik noktaları bulmak için değerlendirme ve stratejiler oluşturmaktan oluşan makroskopik analizdir. Biyolojik kanıt çıplak gözle görülemediğinde, teknolojik yardımı kullanmak gerekir. Bu tespiti için belirli dalga boylarına sahip adli ışık kaynaklarıdır. Günlük adli tıp uygulamasında, meni, tükürük, idrar ve ter gibi bazı biyolojik sıvıların gizli noktaları, flüoresan ile tespit için belirli dalga boylarına sahip ışık radyasyonunun uygulanmasını gerektirir. Lifler ve saçlar alet kullanmadan görülebilen unsurlar olmasına rağmen, arka plandaki kontrast eksikliği, görünürlüğünü zorlaştırır. Bu gibi durumlarda, büyüteçlerin veya ışıkların kullanılması, onları bulmalarına yardımcı olabilecek gölgeler oluşturmaya yardımcı olur.
Bir kez belirlendiğinde, alandaki biyolojik kanıt, sıvının yüzeyine veya desteğine bağlı olarak, steril suyla nemlendirilmiş bezlerle alınır. Ayrıca kanıtın varsayımsal veya doğrulayıcı bir analizini gerçekleştirmek için bir kısmı kesilir. İz kanıt olması durumunda, orijinal desteğinde (tekstil) saklanmalı ve sonraki denemeler için yeterli kanıt bırakıldığından emin olarak analiz edilmelidir. Varsayımsal kromatik reaksiyon testlerinin uygulamaları, insan kökeninin belirlenmesi için doğrulayıcı testin seçiminde oryantasyon için yararlıdır.
Bazı testler yıkıcı süreçler için biyolojik kanıt miktarını dikkate almak ve korunması veya sonraki çalışmalarda daha fazla kullanmak için gerekli önlemleri uygulamak önemlidir. Bazı adli tıp laboratuvarları sperm hücrelerini tanımlamayı amaçlayan optik mikroskoplarla spermi analiz eder. Bu prosedürle ilgili tartışmalar vardır, çünkü numunenin bir kısmı orijinal destekten ayrılmıştır. Ve bu, genetik profillerin elde edilmesi için asgari kanıt olarak kabul edilmesi önemli olsa da diğer analizlerin uygulanmasını zorlaştırmaktadır. Öte yandan laboratuvarlar, spermatozoanın saptanmasında duyarlılığı artırmaya izin veren floresan teknikleri uygulamak için sitolojik preparatlar için floresan mikroskobu kullanır. Bu hücrelerin analiz edilen sıvılarda varlığını doğrular.

Biyolojik Kanıtlardan Hücre İzolasyonu

Biyolojik hücre karışımları, adli genetikteki en büyük zorluklardan birini temsil eder. Prensip olarak, farklı biyolojik sıvılarla bir karışıma daha fazla birey katkıda bulunduğunda, bunların tek genetik profilleri, farklı hücre tiplerini ayırarak elde edilebilir. Tercihli lizis olarak epitel hücrelerinden (dişi fraksiyon) spermleri (erkek fraksiyonu) ayırmak için geliştirilmiş standart DNA ekstraksiyon yöntemleri vardır. Ancak bu yöntemler tek kaynaklı spermi birden fazla erkek donörden ayırmada yetersizdir.
Bu amaca ulaşmak için son zamanlarda modern araçların kullanımı olmuştur. Lazer mikrodiseksiyon (LMD), 40 yılı aşkın süredir var olan bir teknolojidir. Ve bu bir mikroskobun amplifikasyon gücünü lazer teknolojisinin izin verdiği nesnelerin hassas kesimiyle birleştirir. Sadece son on yılda LMD adli tıp amacıyla, özellikle cinsel saldırı vajinal swablardan sperm hücrelerini izole etmek için kullanılmıştır.

Lazer Mikrodiseksiyon (LMD)

LMD’nin adli alanda kullanımı ilk olarak 2003 yılında cinsel saldırı vakalarının slayt smearlarından sperm hücrelerini geri kazanmanın bir yolu olarak tanımlanmıştır. LMD, morfolojik analize veya spesifik floresan boyalarla etiketlemeye dayalı olarak tek tek hücrelerin seçimine izin verir. Sınırlı sayıda hücrenin olduğu durumlarda mikroskobik sperm araştırması kapsamlı ve uzun süreli olabilir.
Bugüne kadar bu tekniğin iki çeşidi kaydedilmiştir: lazer yakalama mikro diseksiyonu (termoplastik bir membranı eriterek hücrelerin toplanması) ve lazerle kesilen mikro diseksiyon (hücreleri mancınıkla hasat etme). Bu tip LMD’lerin çalışma prensipleri, hücrelerin tanımlanması, etraflarındaki destek tabakasında temiz kesimler yapmak için lazeri kullanmak ve yabancı kontaminasyon riskini ortadan kaldıran hücrelerin fiziksel manipülasyonunu gerektirmemektir. Azospermik veya oligospermik bir katkı maddesi içeren bir karışımda hücre analizi daha zordur. Bunun nedeni, sperm hücrelerinin yokluğunda erkek ve dişi hücrelerin ayırt edilemez olmasıdır. Bu nedenle, spesifik floresan boyaların kullanılması gereklidir.

Floresan İnsitu Hibridizasyon ve Lazer Mikro Diseksiyon

LMD kullanımı, spermlerin kuyrukları olmadığında, az sayıda sperm olduğunda veya azospermik vakalarda spermlerin mikroskobik parlak alanda ayırt edilmesi zordur. Bununla birlikte, ejakülatuar kanal, üretradaki lökositler ve epitel hücreleri gibi sperm dışı hücreler menide bulunabilir. Floresan in situ hibridizasyon (FISH) yöntemi, hücresel karışımlarda erkek hücrelerin dişilerden ayırt edilmesini sağlar. DNA, X ve Y kromozomları (floroforlarla işaretlenmiş) için DNA probları ile hibridize edilir. Daha sonra flüoresan mikroskobunda gözlemlenerek bireysel tanımlama sağlar.
FISH teknolojisi ile birlikte LMD, spermik olmayan erkek hücrelerin epitel dişi hücrelerinden tanımlanmasını ve daha sonra ayrılmasını büyük ölçüde geliştirebilir. Bu tekniğin (LMD’li FISH), daha önce ayrılması zor veya imkansız olan örneklerden otozomal STR profilleri üretebildiği gösterilmiştir. Ek olarak, ejakülasyon olmadan penetrasyon, dijital penetrasyon veya oral seks içeren vakalar dâhil olmak üzere dişi hücrelerin erkek hücrelere oranının büyük olduğu birçok başka örnek tipinde uygulamaları vardır. Öte yandan, epitel hücrelerinden spermlerin boyut ve şekil farkını alarak ayrılmasını içeren başka ayırma yöntemleri geliştirilmiştir. Bu sonuçlarda karışık genotipler verir.
Tekli sperm izolasyonu ve tespiti için kullanılan düşük hacimli polimeraz zincir reaksiyonu (LV-PCR), aspirasyon kılcal damarları ve mikro akışkan cihazlar yöntemleri önerilmiştir. Ayrıca mDip tekniği ve akışla floresanla aktifleştirilmiş hücre ayrımı gibi diğer yeni hücre ayırma yöntemleri de önerilmiştir. İmmüno-etiketlemeye dayalı sitometri sadece taze vajinal lavajlara uygulanabilir ve vajinal smearlara veya arşivlenmiş materyallere uygulanamaz.

Kaynakça:
researchgate.net/publication/51612703_DNA_testing_of_sexual_assault_evidence_The_laboratory_perspective
ncjrs.gov/pdffiles1/nij/grants/251036.pdf